新生期不同剂量双酚A暴露对雌性大鼠青春发育的影响

【摘要】目的：研究新生期不同剂量双酚A（bisphenolA，BPA）暴露对雌性SD大鼠阴道开口时间（vaginalopeningday，VOD）、下丘脑kiss-1mRNA及其蛋白kisspeptin表达和子宫、卵巢雌激素受体α（EstrogenReceptor，ERα）mRNA、雌激素受体β（EstrogenReceptor，ERβ）mRNA及其蛋白表达的影响。方法：将新生雌性SD大鼠随机分为6组，即空白对照组、溶剂组、17β-雌二醇组（17β-estradiol，E2，10μgd-1）、低剂量BPA组（25μgkg-1d-1）、中剂量BPA组（50μgkg-1d-1）和高剂量BPA组（250μgkg-1d-1），在生后第0-6天（postnatalday0-6，PND0-6）经皮下注射每日给药。记录VOD，并于当天处死大鼠，取出下丘脑、子宫、卵巢并称重，计算下丘脑、子宫、卵巢脏器系数。对下丘脑组织行免疫组化检测观察kisspeptin定位，子宫、卵巢行HE染色观察形态变化。通过Real—TimePCR的方法测定下丘脑kiss-1mRNA和子宫、卵巢中ERα、ERβmRNA表达量。通过Western-blot的方法测定下丘脑中kisspeptin及子宫、卵巢中ERα、ERβ蛋白表达量。结果：1.对体重的影响：自PND0至PND6每日对大鼠进行皮下注射方式的药物干预，对照组与各干预组间大鼠PND0与PND6体重未有明显差异（P>0.05）。2.VOD记录显示与对照组相比，E2组、50μgkg-1d-1和250μgkg-1d-1BPA组VOD较对照组提前（P<0.05）；溶剂组、25μgkg-1d-1BPA组VOD与对照组相比未有显著差异（P>0.05）。3.下丘脑免疫组化结果提示kisspeptin多位于神经细胞上。4.HE染色结果显示空白对照组、溶剂组、25μgkg-1d-1、50μgkg-1d-1和250μgkg-1d-1BPA组子宫肌层厚度、内膜厚度较E2组厚，卵巢卵泡发育度较E2组高。5.脏器系数结果显示，各干预组下丘脑脏器系数与对照组相比无显著差异（P>0.05），但E2组子宫、卵巢脏器系数较对照组明显降低（P<0.05），溶剂组、BPA干预组较对照组无明显改变（P>0.05）。6.RT-PCR结果显示，溶剂组、25μgkg-1d-1、、50μgkg-1d-1和250μgkg-1d-1BPA组下丘脑kiss-1mRNA及子宫、卵巢ERmRNA表达水平较对照组未有明显差异（P>0.05）；E2组下丘脑kiss-1、子宫ERα、卵巢ERβmRNA表达水平较对照组明显降低（P<0.05），子宫ERβ、卵巢ERαmRNA水平较对照组未有明显差异（P>0.05）。7.Western-Blot结果显示，溶剂组、25μgkg-1d-1、50μgkg-1d-1和250μgkg-1d-1BPA组下丘脑kisspeptin及子宫、卵巢ER蛋白水平较对照组未有明显差异（P>0.05）；E2组下丘脑kisspeptin、子宫ERα、卵巢ERβ蛋白水平较对照组明显降低（P<0.05），子宫ERβ、卵巢ERα蛋白水平较对照组未有明显差异（P>0.05）。结论：①每日皮下注射操作未对注射药物期间大鼠基本体重增长产生明显影响。②下丘脑神经细胞上有kisspeptin表达。③新生期50μgkg-1d-1、250μgkg-1d-1BPA暴露可引起大鼠青春期启动提前。④上述青春期启动提前并没有通过kiss-1基因表达改变来实现，且未对其青春期启动时下丘脑、子宫、卵巢脏器系数，子宫、卵巢发育形态及ER表达产生明显影响。⑤新生期溶剂及25μgkg-1d-1BPA暴露未引起大鼠青春期启动提前。⑥新生期10μgd-1E2暴露可引起大鼠青春期启动提前，且启动时子宫、卵巢发育程度降低，子宫、卵巢脏器系数、下丘脑kiss-1mRNA、子宫ERαmRNA、卵巢ERβmRNA表达量及其蛋白均较对照组明显降低。
【作者】杨帆；
【导师】陈临琪；
【作者基本信息】苏州大学，儿科学，2014，硕士
【关键词】BPA；新生雌性SD大鼠；VOD；下丘脑kiss-1基因；雌激素受体；

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